目的 探究肝喜片通过调控线粒体融合蛋白2(MFN2)、动力相关蛋白1(DRP1)介导的线粒体动态平衡诱导肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制。方法 以HepG2细胞为模型,设置空白对照组和肝喜片低、中、高(10%、15%、20%含药血清)剂量组。采用实时无标记细胞分析动态监测细胞增殖;流式细胞术检测线粒体膜电位、活性氧(ROS)水平及细胞凋亡率;Western blot检测MFN2、DRP1、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)、裂解型PARP1(cleaved PARP1)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、细胞色素c(Cyt c)蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,肝喜片中、高剂量组细胞指数(CI)值降低(P<0.01);与肝喜片中剂量组比较,肝喜片高剂量组CI值降低(P<0.05)。与空白对照组比较,肝喜片各剂量组线粒体膜电位降低(P<0.05,P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.05,P<0.01);与肝喜片低剂量组比较,肝喜片中、高剂量组线粒体膜电位降低(P<0.05),肝喜片高剂量组细胞内ROS水平升高(P<0.01)。与空白对照组比较,肝喜片各剂量组MFN2蛋白表达水平降低(P<0.05)、DRP1蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01);与肝喜片中剂量组比较,肝喜片高剂量组MFN2蛋白表达水平降低、DRP1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与空白对照组及肝喜片低剂量组比较,肝喜片中、高剂量组凋亡率升高(P<0.01);与肝喜片中剂量组比较,肝喜片高剂量组凋亡率升高(P<0.05)。与空白对照组比较,肝喜片各剂量组cleaved PARP1/PARP1比值及BAX蛋白表达水平均升高(P<0.05,P<0.01),肝喜片中、高剂量组Cyt c蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。与肝喜片低剂量组比较,肝喜片中剂量组cleaved PARP1/PARP1比值及Cyt c蛋白表达水平升高(P<0.05),肝喜片高剂量组cleaved PARP1/PARP1比值及BAX、Cyt c蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论 肝喜片通过抑制MFN2表达、激活DRP1介导的线粒体分裂,破坏线粒体动态平衡,诱导线粒体碎片化、氧化应激及膜电位降低,进而促进Cyt c释放、BAX升高和PARP1裂解,最终激活线粒体依赖性凋亡通路。 |